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人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞通過去泛素化和穩(wěn)定KLF4抑制非小細(xì)胞肺癌

更新時間:2022-08-12瀏覽:1715次

今天我們來看看一篇關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的文獻(xiàn),首先還是了解下背景。









肺癌是世界上普遍認(rèn)為的死亡率最高的癌癥,沒有之一。肺癌中約有85%是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。據(jù)報道,早期肺癌患者5年存活率為70%,晚期患者5年存活率不高于20%。在如此高死亡率的情況下,找到新的靶標(biāo)分子對探索NSCLC治療有非凡意義。


之前的研究發(fā)現(xiàn),泛素化涉及包括癌癥在內(nèi)的多種疾病,被認(rèn)為是潛在的治療靶點。OTUD1作為泛素酶的一員,是由481個氨基酸組成的,與影響諸多分子的各種生理功能有關(guān)。在乳腺癌、胰管腺癌、甲狀腺癌等均有相關(guān)研究證實其作用,還有研究發(fā)現(xiàn)OTUD1與改善NSCLC患者的預(yù)后有關(guān),然而目前尚不清楚是如何影響NSCLC的發(fā)展的。本文通過研究發(fā)現(xiàn)OTUD1在NSCLC中下調(diào)并抑制癌細(xì)胞,還發(fā)現(xiàn)OTUD1可以去泛素化并穩(wěn)定KLF4,這種基因在不同癌癥中可以是致癌基因也可以是腫瘤抑制因子。在本文研究中,OUTD1通過穩(wěn)定KLF4蛋白抑制NSCLC的發(fā)展,為NSCLC患者治療提供了一個很有希望的治療靶點。


先看看作者用到哪些組織和細(xì)胞。


  • NSCLC組織和癌旁組織:獲得患者同意并通過倫理審查后,取患者組織于液氮保存?zhèn)溆?,一共6組;

  • HBE細(xì)胞:BEAS-2B細(xì)胞(人正常肺支氣管上皮細(xì)胞),SNL-203;

  • A549細(xì)胞:A549細(xì)胞(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞),SNL-089;

  • PC9細(xì)胞:PC-9細(xì)胞(人肺腺癌細(xì)胞),SNL-152;

  • NCI-H1299細(xì)胞:NCI-H1299細(xì)胞(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞),SNL-223;

  • Calu-3細(xì)胞:Calu-3細(xì)胞(人肺腺癌(胸水細(xì)胞)),SNL-214;



使用到的組織和細(xì)胞還是比較多,看的出來作者還是比較希望實驗結(jié)果更加準(zhǔn)確的。

接下來就看看作者的實驗結(jié)果吧:

以下僅展示部分細(xì)胞實驗結(jié)果(實驗結(jié)果經(jīng)重新調(diào)整,非原文描述):

作者經(jīng)WB檢測OTUD1蛋白表達(dá)量發(fā)現(xiàn),患者癌組織中OTUD1比正常組織低(圖片b,T為癌組織,N為癌旁正常組織),細(xì)胞系檢測也發(fā)現(xiàn)其在癌細(xì)胞中表達(dá)明顯低于正常細(xì)胞(圖片c)。


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隨后,又通過轉(zhuǎn)染方式過表達(dá)OTUD1方式研究A549與PC9細(xì)胞的功能,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過表達(dá)(圖片d)后,細(xì)胞增殖活力下降(圖片e),遷移率下降、侵襲能力降低(f)。


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再通過shRNA沉默OTUD1基因(圖片g),發(fā)現(xiàn)沉默后的細(xì)胞增殖活力上升(圖片h),細(xì)胞遷移和侵襲能力升高(圖片i)。


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通過GEPIA數(shù)據(jù)庫篩選,作者發(fā)現(xiàn)OTUD1與KLF4存在明顯正相關(guān),隨后使用PC-9過表達(dá)和敲除OTUD1的細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn),敲除OTUD1發(fā)現(xiàn)KLF4半衰期顯著降低,但敲除和過表達(dá)的細(xì)胞中KLP4 mRNA表達(dá)量卻沒有明顯差異,說明OTUD1是通過降低KLF4的降解來穩(wěn)定KLF4蛋白的。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)OTUD1是通過去泛素化KLF4來穩(wěn)定KLF4蛋白的,限于篇幅,就不再展示了,有興趣的童鞋可以查看原文。


原文:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1759-7714.14320。

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本文用到的細(xì)胞系,都是常用的肺相關(guān)細(xì)胞,除CALU-3稍微難培養(yǎng)以外,其他細(xì)胞都是比較好培養(yǎng)的:

  1. BEAS-2B細(xì)胞(人正常肺支氣管上皮細(xì)胞,SNL-203是從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細(xì)胞,用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆獲得的,細(xì)胞角蛋白及SV40抗原染色陽性,是肺癌細(xì)胞相關(guān)實驗中常用的對照細(xì)胞;


  2. A549細(xì)胞(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,SNL-089,該細(xì)胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂,角蛋白陽性,這個細(xì)胞大概是比較常用的肺癌細(xì)胞了;


  3. PC-9細(xì)胞(人肺腺癌細(xì)胞,SNL-152,該細(xì)胞是取自日本患者分化型肺腺癌的細(xì)胞,生長時貼壁但仍會有部分圓形細(xì)胞,也是常用的肺腺癌細(xì)胞;


  4. NCI-H1299細(xì)胞(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,SNL-223,這株細(xì)胞來源于一個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移?;颊呓邮芰顺跗诜暖?。細(xì)胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表達(dá)。細(xì)胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液釋放肽(GRP)?。?/span>


  5. Calu-3細(xì)胞(人肺腺癌(胸水細(xì)胞),SNL-214,該細(xì)胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的;該患者曾使用過環(huán)磷酰胺、博來霉素、阿霉素進(jìn)行治療。該細(xì)胞接種至裸鼠可成瘤;可作轉(zhuǎn)染宿主。



END

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